Foto: Pixabay

Foto: Pixabay

Efficiëntie en kosteneffectiviteit van een nieuwe methode voor het opsporen van gastro-intestinale parasieten

De lusmethode blijkt eenvoudig en tijdbesparend te zijn in vergelijking met flotatiemethoden voor het opsporen van gastro-intestinale parasieten bij runderen.

Maagdarmparasieten, waaronder protozoa en helminten, worden wereldwijd vaak aangetroffen bij zowel dieren als mensen. Ze veroorzaken voornamelijk diarree – soms waterig, soms bloederig – en kunnen in ernstige gevallen, bij grote aantallen parasieten of infectie met zeer pathogene soorten, de dood tot gevolg hebben.

Bij vee kunnen parasitaire infecties met een gemiddelde of lage virulentie, die geen duidelijke klinische symptomen vertonen, vaak de groei van dieren vertragen, vooral van pasgeboren of jonge dieren. Dit heeft aanzienlijke economische gevolgen vanwege de verminderde productiviteit in de veehouderij.

Na aseksuele en/of seksuele voortplanting van protozoën of bevruchting van helminten in de darmen, worden parasitaire stadia zoals oöcysten, cysten of eieren via de feces uitgescheiden – het laatste stadium vóór verspreiding naar volgende generaties.

Hoewel er verschillende methoden zijn om deze laatste parasitaire vormen in feces op te sporen, is flotatie de meest gebruikte techniek om infecties te diagnosticeren. Deze methode bestaat uit het scheiden van parasieten (oöcysten, cysten en eieren) van fecesresten en het concentreren van de organismen met behulp van een flotatieoplossing (bijv. sucrose of verzadigde natriumchlorideoplossing), waarbij gebruik wordt gemaakt van verschillen in soortelijk gewicht.

Flotatieprocedures verschillen vaak van laboratorium tot laboratorium en van studie tot studie, waarbij onderzoekers de methoden aanpassen om ze te vereenvoudigen of te compliceren afhankelijk van hun doelstellingen.

Een internationale studie testte de efficiëntie van flotatie met verschillende concentraties van Eimeria tenella-oöcysten en Heterakis gallinarum-eieren als parasieten, gebruikmakend van sacharose- en zoutoplossingen.

Er werden parasitaire fecesoplossingen van tien milliliter gebruikt die E. tenella-oöcysten of H. gallinarum-eieren bevatten. Na vijf minuten centrifugeren bij 1200 g werd het supernatant verwijderd, waarna sucrose of een verzadigde zoutoplossing werd toegevoegd tot een eindvolume van 10 ml en grondig gemengd. Aliquots van 400 µL werden vervolgens genomen en de exacte aantallen oöcysten werden twee keer geteld met een McMaster-kamer.

Na het centrifugeren werd het bovenste oppervlak van de buis voorzichtig afgenomen met een draadopvanglus met een diameter van 8 mm. De oppervlakteoplossing, die de oöcysten bevatte, werd overgebracht op een objectglaasje en afgedekt. Deze methode staat bekend als de lusmethode.

Efficiëntie en kostenvoordeel van de lusmethode voor het opsporen van gastro-intestinale parasieten

Tot op heden zijn vele vergelijkende studies gedaan naar flotatieprotocollen, voornamelijk om specifieke dichtheden, gebruikte reagentia voor flotatieoplossingen en een breed scala aan protozoa en helminten te evalueren. De al in 1939 geïntroduceerde lusmethode wordt echter weinig gebruikt. “Dat zou kunnen verklaren waarom onderzoekers terughoudend zijn in het gebruik ervan”, aldus de studie.

In deze analyse tonen de E. tenella-oöcysten en H. Gallinarum-eitjes aan dat de lusmethode eenvoudig en snel is en in wezen berust op drie stappen: verdunning van fecesmonsters, centrifugeren met een flotatieoplossing en het verzamelen van parasieten met de lus. "In tegenstelling tot de traditionele flotatiemethode is het niet nodig om na het centrifugeren een flotatieoplossing toe te voegen om een meniscus te vormen en de drijvende organismen met een objectglaasje te verzamelen," legt het artikel uit. Hoewel er nog geen duidelijke vergelijkende gegevens tussen de methoden zijn, "zou de lusmethode gevoeliger kunnen zijn dan conventionele flotatiemethoden, omdat deze stappen wegvallen", voegt het artikel eraan toe.

Voor het nauwkeurig tellen van parasieten zoals oöcysten en eitjes in uitwerpselen, worden meestal telkamers zoals die van McMaster gebruikt. "We waren in staat om parasieten gemakkelijker onder de microscoop te detecteren en ontdekten dat oöcysten en eitjes in de buisjes konden worden teruggevonden in een verhouding van ongeveer 2,00 tot 3,08."

"Onze resultaten tonen aan dat de lusmethode een eenvoudige en kosteneffectieve methode is die een effectief alternatief zou kunnen zijn voor flotatietechnieken," concludeert het onderzoek.